识别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四大类微生物的菌落特征。
观察实验:
一、观察内容:
1.观察已知菌的菌落的形态、大小、色泽、透明度、致密度和边缘等特征。
2.根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。
二、实验材料和用具:
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、粘红酵母、热带假丝酵母、细黄链霉菌、灰色链霉菌、黑曲霉、产黄青霉、球孢白伍菌等细菌的斜面菌种。牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基、高氏1号培养基、无菌水。接种环、接种针、酒精灯、无菌培养皿多套、电热恒温箱。
三、操作步骤
(一)制备已知菌的单菌落
1.制备平板将已融化的无菌培养基待冷却至50℃左右,分别制备牛肉膏蛋白胨培养基平板、马铃薯蔗糖培养基平板和高氏1号培养基平板各一皿。
2.制备菌悬液或孢子悬液在培养好的斜面菌种管内加入5mL无菌水,制成菌悬液后备用。
3.制备单菌落通过平板划线法获得细菌、酵母菌和放线菌的单菌落。用三点接种法获得霉菌的单菌落。细菌于37℃恒温培养24~48h,酵母菌于28℃培养2~3d,霉菌和放线菌置28℃培养5~7d,待长成菌落后,仔细观察四大类微生物菌落的形态特征,并将观察结果记录于表中。
(二)制备未知菌落
l.倒平板
2.接种可用弹土法接种,其要点为:采集校园土壤,待风干磨碎后,可将细土撒在无菌的硬板纸表面,先弹去纸面浮土,然后打开皿盖,便含土的纸面对着平板培养基的表面,用手指在硬板纸背面轻轻一弹即可接种上各种微生物。
3.培养将牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中恒温培养2~3d,将马铃薯蔗糖培养基倒置于28℃培养箱中恒温培养3~5d,即可获得未知菌的单菌落。
4.编号从培养好的未知平板中,挑选8个不同的单菌落,逐个编号,根据菌落识别要点区分未知菌落类群,并将判断结果填入表4~2中。
(三)直接观察菌落直接用实验3中的“土壤稀释分离”获得的单菌落进行观察识别,并将结果填入表4-2中。
四、注意事项观察菌落特点时,要选择分离得很开的单个较大菌落;已知菌落和未知菌落要编好号,请勿随意移动开盖,以免搞混菌号。
五、实验报告
细菌菌落特征:凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密,易挑取,正反颜色一致。
酵母菌菌落特征(与细菌相似):比细菌大而厚,不透明,表面光滑、湿润、粘稠,易用针挑起。多呈乳白色。
放线菌菌落特征:致密、坚硬、多皱、不易用针挑起,不透明。孢子成熟后,表面粉末状,干燥(常有土腥味)。
霉菌菌落特征:比细菌菌落大,由细菌组成疏松的绒毛状,絮状或蜘蛛网状,有的无固定大小,延至整个培养基中产色素,使菌落显色。
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