1、基因工程的概念：
| 基因工程的别名 | 基因拼接技术或DNA重组技术 |
| 操作环境 | 生物体外 |
| 操作对象 | 基因 |
| 操作水平 | DNA分子水平 |
| 基本过程 | 剪切→拼接→导入→表达 |
| 结果 | 人类需要的基因产物 |
（1）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
即当限制性内切酶作用于特定的DNA时，把这段序列沿着特定的切点切开的这个过程分两种情况：
a、沿着中轴线切口（即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键）切开，得到的就是两个平末端；
b、在中轴线的两端切口切开，得到的就是两个黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列，然后在G和A间切开，得到的就是两个黏性末端（之间可以根据碱基互补配对原则重组）限制酶的切口不都是一长一短的，一长一短的叫黏性末端，一样长的叫平末端。“粘性末端”在高中教材中也作“黏性末端”。如图：
（2）“分子缝合针”——DNA连接酶
| 种类 | E·coli-DNA连接酶 | T4-DNA连接酶 |
| 来源 | 大肠杆菌 | T4噬菌体 |
| 功能特性 | 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来 | 缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低 |
| 相同点 | 都缝合磷酸二酯键，如图： | |
（3）“分子运输车”——载体
①载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存；具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入；具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒
知识点拨：
1、限制酶识别的序列的特点：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如
以中心线为轴，两侧碱基互补对称；
以
为轴，两侧碱基互补对称。
2、获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。
3、获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生 4个黏性末端或平末端。
4、限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测。
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